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    肿瘤的细胞与分子诊断

    2017-10-05

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      病理学的发展始终是建立在新理论、新技术基础上的。
      病理学诊断也由以形态学观察为基础逐步进入到分子水平,即细胞和分子诊断。
      分子病理学应用细胞分子生物学的理论和技术方法,将对人类疾病发生、发展、发病原因、发病机制、疾   病的形态学变化,从传统病理学的概念深入到从分子或基因水平加以认识。
      分子病理学研究主要以分子病为目标,其中研究最广泛的、发展最快的是肿瘤分子病理研究领域。


    一、细胞与分子诊断在肿瘤研究中的意义和应用
    特点:灵敏度高、特异性强、适用范围广、取材一般不受组织和时相限制。
    应用:
    (1)人类遗传病的基因诊断和产前诊断
    (2)肿瘤
    (3)感染性疾病病原体(病毒,细菌)
    (4)多基因病
    (5)组织器官移植配型
    (6)性别鉴定
    (7)法医学
    (8)医学分子生物学基础研究应用


    1、肿瘤易感基因的检测
       因部分肿瘤的发生具有遗传学基础,故肿瘤遗传相关的易感基因检测对于肿瘤高危人群的筛选具有实用价值。
    2、肿瘤的分类
      使用限制性酶切片段长度多态性,可判断淋巴细胞增生与淋巴瘤及其克隆起源。
    3、肿瘤的早期诊断
      K-ras基因突变是一些肿瘤(胰腺癌、结肠癌、肺癌)的早期行为。
    4、肿瘤的预后判断
      根据某些相关基因的突变、扩增和过表达来判断
    5、肿瘤的个体化和预见性治疗     
    6、肿瘤的预后检测



    二、肿瘤基因过表达及其检测
    1、基因过表达的形式:以基因产物过表达危重要的形式之一
    2、基因过表达的检测
    (1)表达产物的检测
    ELISA,Western blot,流式细胞仪
    (2)基因扩增的检测
    原位杂交,FISH(荧光原位杂交) 
    PCR 
    Southern杂交(DNA分析),Northern杂交(RNA分析)



    三、基因突变及其检测
      突变的结果则使癌基因激活或抑癌基因失活,导致细胞表型发生变化和肿瘤发生。
    1、基因突变的形式
    (1)点突变:是基因在特定的位置上发生的一个核苷酸的改变,使相应蛋白质的一个氨基酸改变,继而改变了蛋白质的空间构型和生物学行为。
    (2)基因缺失:基因片段的缺失,是另一种主要的突变形式。缺失的范围差异较大。
    (3)基因易位或重排:某一基因在肿瘤细胞中从染色体的正常位置转移到其它染色体的某各位置上。
    (4)其它类型的基因突变
     如插入、甲基化、染色体非组蛋白改变等

    2、基因突变的检测方法
    (1)PCR-SSCP法(多聚酶链反应-单链构象多态性)
    (2)HA法(杂合双链分析法)
    (3)突变体富集PCR法
    (4)变性梯度凝胶电泳法(DGGE)
    (5)化学切割错配法(CCM)
    (6)等位基因特异性寡核苷酸分析法(ASO)
    (7)连接酶链反应(LCR)
    (8)等位基因特异性扩增法(ASA)
    (9)RNA酶A切割法
    (10)染色体分析
    (11)DNA序列分析

    四、生物芯片技术
    1991年Fodor 等首先提出DNA芯片和微阵列的概念。
    微阵列技术是在一小片固相载体上储存大量的生物信息,又称为生物芯片。
    根据储存生物信息的类型分为:
    (1)寡核苷酸芯片(DNA chip)
       基于杂交测序技术基础上建立起来的
    (2)cDNA芯片
       DNA chip的一种亚型
    (3)蛋白质芯片
       与DNA chip不同的是在载体上挂载的蛋白质
    (4)组织细胞芯片
       1998年Kononen等在DNA chip的基础上制备的


    作者:健康全记录


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